ATCC農桿菌電轉感受態(tài)細胞 表達分析
簡(jiǎn)要描述：
ATCC農桿菌電轉感受態(tài)細胞 表達分析表達分析 ATCC15834電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉化?；蛐蜑锳grobacterium rhizogenes pRi15834 （agropine type），經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那mei素抗性）檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-14
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農桿菌電轉感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
ATCC；MSU440；Ar 1193；Ar A4；K599；C58C1；Agrobacterium rhizogenes 發(fā)根農桿菌；pCAMBIA2301；Streptomycin 鏈mei素；Rifampicin利fu平；
產(chǎn)品訂購：
貨號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格（元） |
MF2466-0500UL | ATCC Electrocompetent Cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 10×50μl | 720 |
MF2466-2500UL | ATCC Electrocompetent Cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 50×50μl | 3000 |
產(chǎn)品描述
發(fā)根農桿菌（Agrobacterium rhizogenes）是根瘤菌科農桿屬的一種革蘭氏陰性土壤細菌，能夠侵染大多數雙子葉植物和少數單子葉植物以及個(gè)別裸子植物。起關(guān)鍵作用的是其攜帶的Ri質(zhì)粒，含有負責發(fā)根自主性生長(cháng)和冠癭堿合成的基因。結構上與Ti質(zhì)粒類(lèi)似，主要有致毒區（Vir），T-DNA區以及冠癭堿合成功能區等。
根據合成冠癭堿的不同，Ri質(zhì)粒分為4種類(lèi)型：1）甘露堿型；2）黃瓜堿型；3）農桿堿型；4）米奇矛型。
發(fā)根農桿菌菌株ATCC來(lái)源于American type culture collection (ATCC)，為發(fā)根農桿菌原始菌株。ATCC含pRi農桿堿型Ri質(zhì)粒，具有廣泛的宿主范圍（禾本科，豆科，煙草等），特別適合對zi杉醇，青蒿等藥用植物毛狀根的誘導。
我司提供的ATCC電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉化?；蛐蜑?/span>Agrobacterium rhizogenes pRi (agropine type)，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒（卡那mei素抗性）檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品包裝
組分編號 | 組分名稱(chēng) | 貨號（規格） | |
MF2466-0500UL | MF2466-2500UL | ||
MF2466-A | ATCC Electrocompetent Cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2466-B | pCAMBIA2301 Control Vector (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事項
感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
整個(gè)轉化操作，嚴格根據相應溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會(huì )導致轉化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉化效率下降一個(gè)數量級。
為確保高轉化效率，整個(gè)操作過(guò)程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 電轉感受態(tài)細胞中不可混入氣泡，轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養不足，克隆生長(cháng)變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質(zhì)粒用量。
7） ATCC生長(cháng)緩慢，轉化質(zhì)粒后的ATCC涂布在含抗生素的平板上應生長(cháng)72h。
8） 為了保證加的轉化效率，發(fā)根農桿菌的培養建議使用TY培養基（配方見(jiàn)附表1）。
9） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
將0.1 cm電基杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
取-80℃保存的農桿菌感受態(tài)細胞插入冰中5min，待其*融化。
往50μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手拍打管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細胞-質(zhì)粒之后快速轉移到電基杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：質(zhì)粒DNAhao用試劑盒抽提，且用雙蒸水溶解。由于感受態(tài)轉化效率較高，*次使用hao做預試驗確定加的質(zhì)粒用量】。
啟動(dòng)電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來(lái)操作），將電基杯從冰中取出，吸水紙吸干外表面水分，快速放入電轉槽中，啟動(dòng)電基，電基完成快速插入冰中。
加入1ml無(wú)抗生素的TY并轉移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養2~3h。
6) 6,000rpm離心1min，留取 100ul左右上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的TY平板上，用無(wú)菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開(kāi)。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養72h。
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附表1 固體和液體TY培養基配方
組分Component | TY（液體）/升 | TY（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 3g | 3g |
瓊脂 Agar | / | 15g |
補水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | 補水到1L，121℃，20min高壓滅菌 | |
氯化鈣 CaCl2 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養液。 | 配制1M CaCl2水溶液，121℃，20min高壓滅菌。之后按照10ml/L加入上方滅菌的液體營(yíng)養液。 |
附表2 固體和液體YMB培養基配方
組分Component | YMB（液體）/升 | YMB（固體）/升 |
酵母提取物 Yeast extract | 1g | 1g |
MgSO4·7H2O | 0.2g | 0.2g |
K2HPO4 | 0.5g | 0.5g |
NaCl | 0.1g | 0.1g |
甘lu醇 | 10g | 10g |
瓊脂 Agar | / | 15g |
補水到1L，*溶解后，調pH至7.0，121℃，20min高壓滅菌 | 補水到1L，*溶解后，調pH至7.0，121℃，20min高壓滅菌 |
附表3常見(jiàn)發(fā)根農桿菌對抗生素敏感性總表
附表4 ATCC菌株質(zhì)粒轉化篩選抗生素使用濃度
抗生素 | 配方 | 篩選培養基 | 母液 | 工作液 |
硫酸卡那mei素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | YMB 或 TY | 100mg/ml | 100μg/ml |
壯觀(guān)mei素 | 去離子水溶解，0.22μm濾膜除菌 | TY | 50mg/ml | 70μg/ml |
— —Written/Edited by V. Shallan
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ATCC農桿菌電轉感受態(tài)細胞 表達分析
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