大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 表達分析
簡(jiǎn)要描述：
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 表達分析 大腸桿菌OverExpress C43（DE3）菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-14
打印當前頁(yè)OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
OverExpress C43(DE3)；C43(DE3) pLysS；BL21 (DE3)；OverExpress C41(DE3)；表達感受態(tài)細胞；毒性蛋白表達；pET表達載體；
產(chǎn)品訂購：
貨號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格（元） |
MF2342-1000UL | OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 10×100μl | 396 |
MF2342-5000UL | OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 50×100μl | 1696 |
菌株描述
OverExpress C41(DE3)、C41(DE3) pLysS、C43(DE3)和C43(DE3) pLysS都是大腸桿菌（E. Coli）菌株，有效表達不同物種有機生物體包括細菌、酵母菌、植物、病毒和哺乳動(dòng)物來(lái)源的毒性蛋白。
OverExpress C43(DE3)菌株來(lái)源于OverExpress C41(DE3)菌株，通過(guò)篩選OverExpress C41(DE3)對另一個(gè)不同毒性蛋白的抗性菌株而獲得。OverExpress C41(DE3)來(lái)源于BL21(DE3)，此菌株含一個(gè)突變，能降低T7 RNA聚合酶（T7 RNAP）的水平，從而預防許多重組毒性蛋白過(guò)表達引起的細胞死亡。OverExpress C43(DE3)菌與OverExpress C41(DE3)相比，至少攜帶另一個(gè)不同突變，使其獲得更廣泛更高的毒性蛋白表達能力。
OverExpress C43(DE3)菌株含DE3區，表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體（其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調控的T7 RNA聚合酶基因），適用于靶基因克隆進(jìn)入T7啟動(dòng)子表達載體比如pET系列的蛋白生產(chǎn)。
OverExpress C43(DE3)菌株基因型：F– ompT hsdSB (rB- mB-) gal dcm (DE3)
產(chǎn)品描述
本品是大腸桿菌OverExpress C43(DE3)菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達5×108 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。
產(chǎn)品包裝
組分編號 | 組分名 | 貨號（規格） | |
MF2342-1000UL | MF2342-5000UL | ||
MF2342-A | OverExpress C43(DE3) Competent Cell | 10×100μl | 50×100μl |
MF2342-B | Control Plasmid puC19, 10pg/μl | 10μl | 10μl |
注意事項
1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，否則會(huì )減低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） hao在冰上融化感受態(tài)細胞，不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。
3） 進(jìn)行轉化操作時(shí)，需在相應溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。
4） 為防止轉化實(shí)驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到低。
5） 產(chǎn)品包裝內含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實(shí)驗用。
6） 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少終用于涂板的菌量。
7） 誘導時(shí)，IPTG濃度范圍可選：0.1~2mM。
8） 為了得到足量的蛋白，需就加誘導時(shí)間、溫度、IPTG濃度進(jìn)行優(yōu)化。
9） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標準下進(jìn)行】
1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。
2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。
3） 向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。
4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過(guò)夜。
【注意】：
a）涂布用量可根據具體實(shí)驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。
b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。
c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進(jìn)行培養。
相關(guān)產(chǎn)品
貨號 | 名稱(chēng) | 規格 |
MF2331-1000UL | BL21 (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2332-1000UL | BL21 (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2333-1000UL | Rosetta (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
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MF2342-1000UL | OverExpress C43(DE3) Chemically Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2343-1000UL | TB1 Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
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MF2334-1000UL | BL21 Star (DE3) Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MF2335-1000UL | BL21 Star (DE3) pLysS Competent Cell 大腸桿菌感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
MS0021-10G | Chloramphenicol, USP Grade 氯mei素 | 10g |
MS0018-10G | Ampicillin, Sodium Salt 氨芐青mei素鈉 | 10g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0014-1G | Rifampicin, USP Grade 利fu平 | 1g |
MF2002-1G | IPTG 異丙基-β-D-硫代半乳糖苷 | 1g |
附錄I 蛋白誘導步驟（僅作參考）
1）從新鮮涂布平板上挑取一單克隆，轉移到含相應抗生素的5ml LB液體培養基內。
2）37℃搖菌培養過(guò)液。為了小化誘導前目的蛋白的小化表達，添加葡萄糖（終濃度為0.2% w/v）到生長(cháng)培養基內。
3）將步驟2）中過(guò)夜培養的菌液吸取0.5ml接種到含相應抗生素的50ml LB液體培養基內。
4）37℃搖菌培養直至OD600達到0.6~0.8。
5）加入IPTG使其終濃度為1mM。目的蛋白的加誘導時(shí)間可能在2~16h，依蛋白而異。
6）37℃培養3~4h。為了確定目的蛋白的加誘導時(shí)間，建議作一個(gè)時(shí)間周期優(yōu)化實(shí)驗，范圍從2~16h。
7）將培養物冰浴10min。4℃，5,000 x g離心10min收集菌株。
8）吸掉上清，將沉淀保存在-20℃（也能保存在更低的溫度）。
IPTG母液（1M）配制
稱(chēng)量2.38g IPTG（Mw: 238.30）溶于適量去離子水，充分溶解后，調整終體積到10ml，并過(guò)濾除菌，即得到1M ITPG母液。
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 表達分析
大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 表達分析