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BL21系列感受態(tài)細胞常見(jiàn)問(wèn)題(懋康生物整理)

BL21系列感受態(tài)細胞常見(jiàn)問(wèn)題

 

以下是我司(懋康生物)整理的BL21系列感受態(tài)細胞常見(jiàn)問(wèn)題,如有更多問(wèn)題,歡迎在產(chǎn)品頁(yè)給我們留言或發(fā)郵件到maokang 。

 

Part 1、BL21/BL21(DE3)/ BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)細胞

一、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株和基因型

宿主菌Host Strain

基因型Genotype

BL21 strain

E. coli B F-ompT hsdSB(rB-mB-) gal dcm

BL21 (DE3) strain

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3)

BL21 (DE3) pLysS strain      

E. coli B F-ompThsdSB(rB-mB-)galdcm(DE3) pLysS (CamR)   

基因型說(shuō)明:

a)以上三個(gè)宿主菌都是大腸桿菌E. Coli. B/r菌株,不含lon蛋白酶,也缺乏外膜蛋白酶OmpT。這兩個(gè)關(guān)鍵蛋白酶的缺乏降低菌株內表達外源蛋白的降解率。

b)DE3命名表明該菌株染色體上整合λ噬菌體DE3溶原體(DE3 lysogen)(其上攜帶lacUV5啟動(dòng)子調控的T7 RNA聚合酶基因),IPTG能誘導T7 RNA聚合酶的表達。

c)pLysS命名表明該菌株攜帶pLysS質(zhì)粒,含有表達T7溶菌酶的基因,T7溶菌酶能夠作用于大腸桿菌細胞壁上的肽聚糖溶解大腸桿菌,從而能夠降低目的基因的背景表達水平,但不干擾IPTG誘導的表達。pLysS質(zhì)粒賦予菌株氯霉素抗性(CamR),而且含有p1復制起始子,這一起始子使該菌株兼容于含ColE1或pMB1復制起始子的質(zhì)粒(比如pUC或pBR322來(lái)源的質(zhì)粒)。

 

二、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的應用特征

BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS三種宿主菌內T7啟動(dòng)子表達載體(比如pCAL, pET載體)呈現不同的蛋白表達水平。BL21(DE3)感受態(tài)細胞是型菌株,滿(mǎn)足高水平蛋白表達且容易誘導。BL21 (DE3) pLysS感受態(tài)更嚴格控制毒性蛋白表達且具氯霉素抗性。

表達宿主

誘導方法

優(yōu)點(diǎn)

缺點(diǎn)

BL21

λ噬菌體CE6感染

zui嚴格控制背景表達(非誘導表達)

誘導不如DE3衍生菌有效;誘導(感染)過(guò)程更冗長(cháng)

BL21 (DE3)

IPTG誘導lacUV5啟動(dòng)子驅動(dòng)的T7聚合酶

高水平表達

T7聚合酶泄露表達,引起潛在毒性蛋白的背景表達(非誘導表達)

BL21 (DE3) pLysS

IPTG誘導的T7聚合酶

容易誘導

與BL21 (DE3)相比,稍微抑制誘導表達

 

三、BL21/BL21(DE3)/BL21 (DE3) pLysS菌株的異源蛋白表達特征

表達宿主

異源蛋白(Heterologous protein)表達特征

BL21 strain

非毒性蛋白的高水平表達,不能用于T7啟動(dòng)子驅動(dòng)的蛋白表達(如pET) 

BL21 (DE3) strain

非毒性蛋白的高水平表達,用于T7啟動(dòng)子驅動(dòng)的蛋白表達(如pET)

BL21 (DE3) pLysS strain     

非毒性和毒性蛋白的高水平表達,背景表達低于BL21 (DE3),BL21

 

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價(jià)格(元)  

MF2331-1000UL     

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細胞  

10×100μl    

280

MF2331-5000UL

BL21 (DE3) Chemically Competent Cell 化學(xué)感受態(tài)細胞

50×100μl

1280

MF2332-1000UL

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 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

 

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