潮霉素B Hygromycin B穩定轉染細胞的篩選
1) 轉染48h后，用含有適當濃度的潮霉素B篩選培養基來(lái)傳代細胞(直接傳代或者稀釋后傳代)。
注意：細胞處于活躍分裂狀態(tài)時(shí)抗生素的殺傷效果。則當細胞過(guò)于稠密，其效率會(huì )降低。為了得到較好的篩選效果，將細胞稀釋至豐度不超過(guò)25%。
2) 每隔3-4天更換含有藥物的篩選培養液。
3) 篩選7天后觀(guān)察并評估細胞克隆(集落)的形成情況。集落的形成可能還需要一周或者更多的時(shí)間，這取決于宿主細胞類(lèi)型，轉染，以及篩選效果。
4) 挑取并轉移5-10個(gè)抗性克隆于35mm細胞培養板，繼續用含藥物的篩選培養液維持培養7天。
5) 之后更換正常培養基培養即可。
潮霉素B Hygromycin B時(shí)的注意事項
1) 潮霉素B Hygromycin B的抗性基因(hyg或hph)除了來(lái)自E. Coli.之外，還發(fā)現于其他的菌株，包括Streptomyces hygroscopicus和Klebsiella pneumoniae。
2) 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。