Chemically 大腸桿菌 生化試劑

TG1 Chemically Competent Cell  

大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞

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菌株描述

TG1來(lái)源于E. coli K-12菌株，是目前生長(cháng)速度最快的克隆用大腸桿菌菌株。F′附加體上的lacIq的存在使其能?chē)乐斝驼{控表達含大腸桿菌啟動(dòng)子（由lac操縱子序列控制，比如：T5，trc，tac）的載體。TG1是常用的噬菌體展示用菌株，也適用于普通質(zhì)粒的構建，lacIqZΔM15的存在使其可用于藍白斑篩選等實(shí)驗。

TG1菌株基因型：F’ [traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15] supE thi-1 Δ(mcrB-hsdSM)5(rK-mK-) Δ(lac-proAB)

產(chǎn)品描述

本品是大腸桿菌TG1菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率可達1×109 cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。

產(chǎn)品包裝

保存與運輸條件：

保存：-80℃保存，六個(gè)月有效。

運輸：干冰運輸。

注意事項

1） 感受態(tài)細胞必須用干冰運輸，感受態(tài)細胞應在-80℃保存。

2） 感受態(tài)細胞最好在冰上融化，不可在冰上放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，長(cháng)時(shí)間存放會(huì )降低轉化效率。

3） 進(jìn)行轉化操作時(shí)，需在相應溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4） 為防止轉化實(shí)驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到最*-低。

5） 產(chǎn)品包裝內含質(zhì)粒pUC19 DNA(10pg/μl)，供對照實(shí)驗用。

6） 后續進(jìn)行陽(yáng)性菌落的擴繁和高純質(zhì)粒的獲取，推薦選用TB培養基（Terrific Broth），優(yōu)于LB或SOC。

7） TG1菌株不含核酸酶endA1突變，體內核酸酶含量較高，質(zhì)粒提取時(shí)，推薦使用質(zhì)粒提取試劑盒中的去蛋白液，為求去除菌體內大量的核酸酶。

8） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

使用方法【所有操作均在無(wú)菌條件的標準下進(jìn)行】

1） 從-80℃冰箱取出取感受態(tài)細胞，迅速置于冰浴中，5min后待菌塊融化，加入目的DNA（質(zhì)?；蜻B接產(chǎn)物），用手輕彈管底輕輕混勻（避免用槍吸打），冰浴靜置25min。

2） 42℃水浴熱激45s，迅速將離心管轉移到冰浴中，冰上靜置2min。此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

3） 向每個(gè)離心管中加700 μl無(wú)菌的2YT或LB培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃搖床，200 rpm振蕩培養60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

4） 低速離心收菌（比如5000rpm，1min），留取100μl左右上清，用槍輕輕吹打重懸菌塊，之后加到含所選質(zhì)粒篩選抗生素的2YT或LB固體瓊脂培養基上，用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃培養過(guò)夜（12-15h）。

【注意】：

a）涂布用量可根據具體實(shí)驗調整。若轉化的DNA總量較多，可不用離心，直接取少量轉化產(chǎn)物涂布平板；反之，若轉化的DNA總量較少，則通過(guò)離心（5000 rpm，1min）后吸除部分培養液，懸浮菌體后將其涂布于一個(gè)平板中。原則是以在平板上能挑到單克隆菌落為宜。

b）新制備的固體培養基不易涂干，可將平板正置于37℃直至液體被吸收后再倒置培養。

c）涂布剩余的菌液可置于4℃保存，如果次日的轉化菌落數過(guò)少，可以將剩下的菌液再涂布新培養基進(jìn)行培養。

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— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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Chemically 大腸桿菌 生化試劑

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