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AO/EB雙染試劑盒 細胞增值

AO/EB雙染試劑盒 細胞增值

簡(jiǎn)要描述:

AO/EB雙染試劑盒 細胞增值是一種異染的核酸結合染料,具細胞膜滲透性,通過(guò)插入或靜電吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA(dsDNA)結合發(fā)射綠色熒光(Ex/Em=502/525nm),與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結合發(fā)射紅色熒光(Ex/Em=460/650nm),少量結合呈橙紅色熒光。

產(chǎn)品時(shí)間:2024-03-13

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AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒


關(guān)鍵詞:

吖啶橙Acridine Orange,AO;溴化乙錠(Ethidium Bromide, EB);Apoptotic cell 凋亡細胞;Necrotic cells壞死細胞;Annexin V/PI 細胞凋亡雙染;


產(chǎn)品信息

產(chǎn)品名稱(chēng)

產(chǎn)品編號

規格

價(jià)格(元)

AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

MX3249-100T

100T

180

產(chǎn)品描述

吖啶橙Acridine Orange,AO)是一種異染的核酸結合染料,具細胞膜滲透性,通過(guò)插入或靜電吸引的方式與DNA或RNA結合。當與雙鏈DNA(dsDNA)結合發(fā)射綠色熒光(Ex/Em=502/525nm),與單鏈DNA(ssDNA)或RNA結合發(fā)射紅色熒光(Ex/Em=460/650nm),少量結合呈橙紅色熒光。溴化乙錠(Ethidium Bromide, EB)是一種多環(huán)芳烴熒光小分子和核酸插入劑,嵌合到雙鏈DNA或RNA的堿基對內,無(wú)堿基特異性,呈紅色熒光((Ex/Em=518/605nm)。EB不具細胞膜滲透性。

吖啶橙(AO和溴化乙錠(EB)常常聯(lián)合使用來(lái)觀(guān)察細胞核變化和凋亡小體形成,這些都是凋亡的特征。兩者結合能區分活細胞、凋亡細胞和壞死細胞。工作原理在于吖啶橙能同時(shí)染活細胞和死細胞,EB只能對喪失膜完整性的細胞進(jìn)行染色?;罴毎示鶆虻木G色。早期凋亡細胞呈綠色,并且在細胞核能看到亮綠色的點(diǎn),由于染色體濃縮和核斷裂。晚期凋亡細胞也會(huì )被EB著(zhù)色,從而染成橙紅色,但,與壞死細胞相比,晚期凋亡細胞會(huì )有濃縮和常常斷裂的核。壞死細胞也被染成橙紅色,但會(huì )有和活細胞相似的核形態(tài),沒(méi)有濃縮的染色體。

我司(懋康生物)提供的AO/EB雙染試劑盒(AO/EB Double Staining Kit)提供完整的試劑,操作簡(jiǎn)單,根據說(shuō)明書(shū)操作能做100個(gè)反應。


產(chǎn)品包裝

編號

組分名稱(chēng)

保存方法

貨號(規格

MX3233-20T

MX3249-A

AO Stain Solution 吖啶橙染液

4℃避光

200μl

MX3249-B

EB Stain Solution 溴化乙錠染液

4-25℃避光

200μl

MX3249-C

Dilution Buffer 稀釋緩沖液

4℃避光

50ml


注意事項

1)AO與EB都有一定毒性,請小心操作。

2)為了您的安全和健康,請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。


使用方法

1. 染色工作液的制備

于正式實(shí)驗前,取吖啶橙染液(試劑A)、溴化乙錠染液(試劑B)、稀釋緩沖液(試劑C),按照A:B:C=1:1:8的比例稀釋成所需的AO/EB染色工作液。

2. 細胞準備

貼壁細胞:按照常規方法消化。于1000rpm離心5min,收集細胞沉淀,用PBS清洗一次。

懸浮細胞:于1000rpm離心5min,收集細胞沉淀,用PBS清洗一次。

之后用稀釋緩沖液(試劑C)重懸細胞,細胞計數,調整細胞密度為0.5-5×106個(gè)/ml。

3. 染色

每25μl細胞懸液中,加入2μl 新鮮制備的AO/EB染色工作液,輕輕混合均勻。室溫孵育5~10min。

4. 觀(guān)察

取干凈載玻片,滴加5~10μl 染色的細胞懸液,蓋上蓋玻片。使用熒光顯微鏡的熒光素濾片和60倍放大的物鏡來(lái)觀(guān)察和計數。該測定至少重復三次,每次觀(guān)察的總細胞至少100個(gè)。

【注意】:根據細胞類(lèi)型選擇理想的物鏡放大倍數(更高或更低),前提是必須看清核形態(tài)。

應用示例(來(lái)自文獻):

文獻:Dual AO/EB Staining to Detect Apoptosis in Osteosarcoma Cells Compared with Flow Cytometry.

染色方法:Dual fluorescent staining solution (1 μl) containing 100 μg/ml AO and 100 μg/ml EB (AO/EB) was added to each suspension and then covered with a coverslip. The morphology of apoptotic cells was examined and 500 cells were counted within 20 min using a fluorescent microscope (OLYMPUS). Dual acridine orange/ethidium bromide (AO/EB) staining method was repeated 3 times at least.


Fig. (A) 陰性對照細胞(正常細胞):環(huán)形細胞核均勻分布在細胞中央。(B)實(shí)驗組 (早期凋亡細胞): 吖啶橙(AO)染色后的細胞核呈黃綠色熒光,以月牙形或顆粒的形態(tài)聚集位于細胞的一邊。(C) 實(shí)驗組 (晚期凋亡細胞): 經(jīng)EB染色后的細胞核呈橙紅熒光,集中聚集且偏重定位。(D) 壞死細胞:壞死細胞體積增加,顯示平整的橙紅色熒光和不清晰的輪廓。細胞正要溶解或接近崩潰。


相關(guān)產(chǎn)品

貨號

名稱(chēng)

規格

MF0756-1G

Ethidium Bromide (EB) 溴化乙錠

1g

MF0756-5ML

EB (10 mg/ml in Water) EB水溶液(10 mg/ml)

5ml

MX4217-250MG

Acridine Orange Hydrochloride 吖啶橙鹽酸鹽

250mg

MX4230-5G

Acridine Orange hemi(zinc chloride) salt 吖啶橙半氯化鋅鹽

5g

MX3249-100T

AO/EB Double Staining Kit AO/EB雙染試劑盒

100T

MX3250-100T

Hoechst 33258/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒

100T

MX3201-100T

Hoechst 33342/PI Double Stain Kit 細胞凋亡雙染試劑盒

100T



— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】



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AO/EB雙染試劑盒 細胞增值

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