Calcein AM/PI 雙染試劑盒（活死細胞雙染）
簡(jiǎn)要描述：
本鈣黃綠素AM/典化丙啶雙染試劑盒（Calcein AM/PI Double Stain Kit，Calcein AM/PI 雙染試劑盒（活死細胞雙染）），包含鈣黃綠素AM和典化丙啶兩種熒光染料，用于對活細胞和死細胞的同時(shí)染色，即是常稱(chēng)的活細胞/死細胞雙染試劑盒（Live/Dead Cell Double Staining Kit）。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-21
打印當前頁(yè)Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒
產(chǎn)品關(guān)鍵詞：
Calcein, AM 鈣黃綠素AM；Propidium Iodide (PI) 典化丙啶；Live/Dead Cell Double Staining Kit 活細胞/死細胞雙染色試劑盒；SYTOX Red Dead Cell Stain 死細胞染色；溴乙啡錠二聚體（EthD-1）；CAS NO：148504-34-1；
產(chǎn)品信息
| 產(chǎn)品名稱(chēng) | 產(chǎn)品編號 | 規格 | 價(jià)格（元） |
| Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒 | MX3012-500T | 500T | 690 |
| Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒 | MX3012-1000T | 1000T | 1240 |
【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生物（maokangbio）整理的鈣黃綠素（Calcein）系列產(chǎn)品專(zhuān)題。
【溫馨提示】：見(jiàn)我司懋康生物（maokangbio）整理的鈣黃綠素AM（Calcein AM），超純級別，50μg特殊包裝，單個(gè)產(chǎn)品信息。
試劑盒組分
| 編號 | 組分 | 保存方法 | 產(chǎn)品編號/規格 | |
| MX3012-500T | MX3012-1000T | |||
| MX3012-A | Calcein AM Solution (4 mM) | -20ºC避光 | 50μl | 50μl×2 |
| MX3012-B | PI Solution（1.5 mM） | -20ºC避光 | 200μl | 200μl×2 |
| MX3012-C | 10×Assay Buffer | -20ºC~4℃ | 50ml | 100ml |
產(chǎn)品描述
本鈣黃綠素AM/典化丙啶雙染試劑盒(Calcein AM/PI Double Stain Kit)，包含鈣黃綠素AM和典化丙啶兩種熒光染料，用于對活細胞和死細胞的同時(shí)染色，即是常稱(chēng)的活細胞/死細胞雙染試劑盒（Live/Dead Cell Double Staining Kit）。
試劑盒工作原理在于：Calcein AM（鈣黃綠素乙酰甲酯），CAS NO：148504-34-1，一種具高度親脂性和細胞膜滲透性的活細胞熒光染料。本身不具熒光，一旦進(jìn)入細胞后，被細胞內酯酶水解生成鈣黃綠素（calcein），產(chǎn)生亮綠色熒光（Ex/Em= 490nm/515nm）。因此，Calcein AM僅對活細胞進(jìn)行染色。另一方面，典化丙啶（PI），一種細胞核染料，不能穿透完整的活細胞膜。只能穿透死細胞的不規則區域進(jìn)入細胞核，然后嵌入DNA雙螺旋區域，產(chǎn)生紅色熒光（Ex/Em= 535nm/617nm）。由于Calcein和PI-DNA都可被490 nm激發(fā)，因此可用熒光顯微鏡同時(shí)觀(guān)察活細胞和死細胞。而用545 nm激發(fā)，僅可觀(guān)察到死細胞。結合這些特點(diǎn)，Calcein, AM和PI經(jīng)常被結合用作活細胞和死細胞的雙重染色。
測定方法與結果呈現
1） 熒光顯微鏡（Fluorescent Microscopy）
檢測方法：490±10 nm激發(fā)能同時(shí)看到呈黃-綠色熒光的活細胞和紅色的死細胞。另，545nm激發(fā)可能只能看到呈紅色的死細胞。
Fig 1. Fluorescence microscopy images of calcein-AM (green) and propidium iodide (red). The macrophages differentiated into osteoclasts on (a) nt-TiO2 and (b) nt-TiO2-P for 4 days. Cells were then examined by fluorescence microscopy (Axioplan 2, Carl Zeiss, Oberkochen, Germany) with 490-nm excitation for the simultaneous monitoring of viable and dead cells. [Reference: Tae-Hyung Koo et al. Immobilization of pamidronic acids on the nanotube surface of titanium discs and their interaction with bone cells. Nanoscale Res Lett. 2013; 8(1): 124.]
2） 熒光酶標儀（Fluorescent Plate Reader）
檢測方法：96孔透明底的黑色酶標板（96-well black plate with clear bottom），Calcein檢測的激發(fā)波長(cháng)為490nm，發(fā)射波長(cháng)為520nm；PI檢測的激發(fā)波長(cháng)為530nm，發(fā)射波長(cháng)為617nm；
Fig 2. HeLa cells were seeded at 1,500 to 100,000 cells/well in a 96-well black plate with clear bottom and incubated overnight. Cells were exposed to Triton X-100 (0.05%, 10 min) and cell viability/toxicity was measured using Calcein AM-PI double stain kit. Relative fluorescence for Calcein AM (left) and Propidium Iodide (right) are shown.
3） 流式細胞儀（Flow cytometer）
檢測方法：流式細胞儀，Calcein檢測的激發(fā)/發(fā)射波長(cháng)為488/535nm，PI的激發(fā)和發(fā)射波長(cháng)為488/620nm。
Fig 3. Quantification of calcein and PI staining in WT cells and in cells incubated with increasing concentrations of miltefosine: 20μM, 40μM or 100μM for 24h. [Reference: Basmaciyan L et al. Calcein+/PI- as an early apoptotic feature in Leishmania. PLoS One. 2017 Nov 7;12(11):e0187756.]
注意事項
1） 由于Calcein-AM對濕度非常敏感，若是Calcein-AM溶液每次取完需要量后，必須緊緊密封蓋子。建議根據單次用量，分裝密封保存。Calcein-AM工作液必須現配現用。
2） 典化丙啶（PI）有一定的致癌性，操作時(shí)一定要注意防護。若接觸到皮膚，需要立即用自來(lái)水清洗。
3） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法【詳見(jiàn)懋康maokangbio】
一、試劑準備
1.1 1×反應緩沖液（Assay Buffer）的配制
從低溫冰箱內取出10×Assay Buffer，根據單次用量無(wú)菌條件取出適量，用去離子水（dH2O）做10倍稀釋以得到1×Assay Buffer。
1.2 1×染色工作液（Stain Buffer）的配制
1） 先將低溫保存的Calcein AM溶液 (4 mM)和PI溶液（1.5 mM）室溫回溫至少20min，使其充分融化。【注意：*次使用時(shí)建議對儲存液根據單次用量分裝，特別是Calcein AM，以減少反復凍融次數。】
二、染色步驟
常見(jiàn)問(wèn)題【詳見(jiàn)懋康maokangbio】
1、 該試劑盒適用任何細胞類(lèi)型？
基本上適用于任何含酯酶活性的動(dòng)物細胞。植物和細菌細胞因含有細胞壁，Calcein-AM不能進(jìn)入因此無(wú)法染色。有可能對原生質(zhì)體進(jìn)行染色。
2、 用相同濃度有可能對所有哺乳動(dòng)物細胞進(jìn)行染色？
對所有細胞都用相同的濃度是很不合理的。Calcein-AM和PI的zui加工作濃度根據細胞類(lèi)型差異很大。有必要根據具體細胞來(lái)確定zui價(jià)染料濃度。參考說(shuō)明書(shū)染料工作濃度優(yōu)化方法。
3、 Calcein-AM對細胞有毒？
與其他相似的活細胞染料比較，Calcein-AM基本無(wú)毒（毒性zui?。?。見(jiàn)文獻EL.S.D.Clerck,et.al., J.Immunol.Methods, 172,115-124(1994)
4、 試劑盒如何保存？
密封-20℃保存。Calcein-AM遇潮會(huì )水解，因此直至管子溫度達到室溫后才能開(kāi)蓋。使用后擰緊蓋子。用緩沖液或者培養基稀釋后的染色工作液需即刻使用。不能保存后使用。
相關(guān)產(chǎn)品
| 貨號 | 名稱(chēng) | 規格 |
| MX3011-50UG | Calcein, AM, Ultra Pure Grade 鈣黃綠素（綠色） | 50μg |
| MX3012-500T | Calcein AM/PI Double Stain Kit 活細胞/死細胞雙染試劑盒 | 500T |
| MX3013-1MG | Calcein Red, AM 鈣黃綠素紅（紅色） | 1mg |
| MX3014-1MG | Calcein Deep Red Acetate 鈣黃綠素深紅醋酸鹽 | 1mg |
| MZ8471-1G | Probenecid 丙磺舒 | 1g |
| MZ8472-154MG | Probenecid Sodium, Water Soluble 丙磺舒鈉（水溶性） | 2×77mg |
| MX4205-10MG | Propidium Iodide 典化丙啶 | 10mg |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
Calcein AM/PI 雙染試劑盒（活死細胞雙染） Calcein AM/PI 雙染試劑盒（活死細胞雙染） ?