SURE化學(xué)感受態(tài)細胞（熱激法）

SURE Chemically Competent Cell 大腸桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞

產(chǎn)品標簽：

SURE；SURE-2；Stbl3；Stable；Direct repeats 正向重復片段；Retroviral sequences 逆轉錄病毒序列；Stratagene;

【好消息】：見(jiàn)我司的感受態(tài)細胞*活動(dòng)。買(mǎi)感受態(tài)細胞得京東卡，發(fā)表使用評論，贏(yíng)紅包，雙重驚喜，行動(dòng)起來(lái)啦。

產(chǎn)品組分：

菌株描述

SURE菌株是Agilent (Stratagene)公司開(kāi)發(fā)，特別設計用于克隆在傳統的大腸桿菌菌株中“無(wú)法克隆”的某些DNA段。SURE菌株破壞了重組酶系統整條通路上的組分，這些組分能催化重組和刪除體內的非標準二級和三級結構，包括十字形（由反向重復序列引起）和Z字形的DNA，經(jīng)常出現在真核生物DNA中，能阻止真核DNA克隆進(jìn)入傳統大腸桿菌菌株中。SURE含限制缺陷（McrA^-, McrCB^-, McrF^-, Mrr^-, HsdR^-），使其無(wú)法對外源DNA進(jìn)行標記和限制，從而提高外源甲基化DNA的克隆效率。也含內切酶缺陷（endA），和重組缺陷（recB recJ），提高了外源DNA的穩定性。存在于F´因子上的lacI^q ZΔM15使菌株適用于藍白斑。菌株本身含卡那霉素（Kan^R）和四環(huán)素（Tet^R）特性。

SURE菌株基因型：e14-(McrA-) Δ(mcrCB-hsdSMR-mrr)171 endA1 gyrA96 thi-1 supE44 relA1 lac recB recJ sbcC umuC::Tn5 (Kanr) uvrC [F´ proAB lacIqZΔM15 Tn10 (Tetr)].

產(chǎn)品描述

本品是SURE菌株經(jīng)特殊工藝制作所得的感受態(tài)細胞，可用于DNA的熱擊轉化。經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測轉化效率＞5×10⁸ cfu/μg DNA。且在-80℃能穩定保存幾個(gè)月轉化效率不發(fā)生改變。

注意事項

1）   感受態(tài)細胞必須用干冰運輸。感受態(tài)細胞應在-80℃保存，不可反復凍融且放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，否則會(huì )減低感受態(tài)細胞的轉化效率。

2）   zui號在冰上融化感受態(tài)細胞。

3）   進(jìn)行轉化操作時(shí)，需在相應溫度及無(wú)菌條件下進(jìn)行。

4）   轉化高濃度質(zhì)?；蚋咝蔬B接產(chǎn)物可相應降低zui終用于涂板的菌量。

5）   菌株本身含卡那霉素和四環(huán)素特性，攜帶此兩種抗性的質(zhì)粒不適合克隆到SURE細胞。當攜帶抗霉素抗性基因（Cam^R）的質(zhì)粒轉化進(jìn)入SURE細胞，使用添加100μg/ml氯霉素的LB固體平板來(lái)篩選克隆子。SURE細胞本身能耐受＜40μg/ml氯霉素，但對100μg/ml 氯霉素很敏感。

6）   為防止轉化實(shí)驗不成功，可保留部分連接反應液以重新轉化，將損失降到zui低。

7）   采用常規操作流程轉化SURE感受態(tài)細胞，轉化效率可達5×10⁸ cfu/μg DNA。若是對轉化效率要求更高，可使用標準操作流程。

8）   產(chǎn)品包裝內含質(zhì)粒pUC19 DNA(10 pg/μl)，供對照實(shí)驗用。

9）   為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。

常規操作流程【所有操作均在無(wú)菌條件的標準下進(jìn)行】

標準操作流程【所有操作均在無(wú)菌條件的標準下進(jìn)行】

1）   冰上提前預冷14ml BD Falcon聚丙烯圓底離心管， 42℃預熱SOC培養基。

2）   從-80℃取出感受態(tài)細胞迅速置于冰浴中5min使其*融化。用手輕彈混勻吸取100 μl細胞到預冷的14ml離心管內。

3）   加1.7μl β-ME（1.42M）到細胞內。【β-ME能提高轉化效率】

4）   輕彈管子。置于冰上孵育10min，每2min輕彈混勻細胞一次。

5）   往細胞內加入0.1-50ng目的DNA，輕彈混勻細胞，冰上靜置孵育30min。

6）   42℃熱激45s，熱激過(guò)程的持續性非常重要。冰上靜置2min，此過(guò)程不要搖動(dòng)離心管。

1）   向每個(gè)離心管中加入900 μl預熱的無(wú)菌SOC培養基（不含抗生素），混勻后置于37℃ 搖床，225-250 rpm振蕩培養60min，目的使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

2）   吸取≤200 µl 轉化菌液，加到含相應抗生素的LB固體瓊脂培養基上（若需要顏色反應，平板含IPTG+ X-gal），用無(wú)菌的涂布棒將細胞均勻涂開(kāi)，將平板置于室溫（或37℃）直至液體被吸收，倒置培養，37℃過(guò)夜培養?！?strong>注意：若是進(jìn)行藍白斑篩選，37℃至少培養17h，使得顏色能生成。另外將平板置于4℃孵育2h，能加強顏色反應?！?/span>

附表1 固體和液體LB培養基配方

附表2 固體和液體2-YT培養基配方

 — —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。

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