AGL1 農桿菌電轉感受態(tài)細胞
簡(jiǎn)要描述：
AGL1 農桿菌電轉感受態(tài)細胞：我司懋康生物提供的AGL1電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉化?；蛐虲58 RecA （rifR/carbR） Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品時(shí)間：2024-03-26
打印當前頁(yè)AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞
產(chǎn)品標簽：
AGL1菌株；農桿菌感受態(tài)細胞；Rifampicin（Rif） 利fu平；Kanamycin（kan）卡那mei素； EHA101；LBA4404；GV3101；植物轉基因研究；
貨號 | 產(chǎn)品名稱(chēng) | 規格 | 價(jià)格（元） |
MF2310-0500UL | AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 10×50μl | 600 |
MF2310-2500UL | AGL1 Electrocompetent cell 農桿菌電轉感受態(tài)細胞 | 50×50μl | 2400 |
【好消息】：見(jiàn)我司的感受態(tài)細胞*活動(dòng)。買(mǎi)感受態(tài)細胞得京東卡，發(fā)表使用評論，贏(yíng)紅包，雙重驚喜，行動(dòng)起來(lái)啦。
產(chǎn)品描述：
AGL1菌株的染色體背景為C58，RecA，核基因含利fu平抗性基因rif和羧芐青mei素抗性基因carb，為了便于轉化操作，此菌株攜帶一無(wú)自身轉運功能的琥珀堿型Ti質(zhì)粒pTiBo542DT-DNA，此質(zhì)粒含有vir基因（vir基因是T-DNA插入植物基因組必需的元件，pTiBo542DT-DNA質(zhì)粒自身的T-DNA轉移功能雖被破壞，但可以幫助轉入的雙元載體T-DNA順利轉移）。AGL1菌株適用于擬南芥、水稻、楊樹(shù)等植物的轉基因操作。
我司懋康生物提供的AGL1電轉感受態(tài)細胞經(jīng)特殊工藝制作，特別適合大質(zhì)粒的轉化?；蛐?/span>C58 RecA (rifR/carbR) Ti pTiBo542DT-DNA Succinamopine，經(jīng)pCAMBIA2301質(zhì)粒檢測轉化效率>105 cfu/μg DNA。
產(chǎn)品組分：
組分編號 | 組分名稱(chēng) | 貨號（規格） | |
MF2310-0500UL | MF2310-2500UL | ||
MF2310-A | AGL1 Electrocompetent cell | 10×50μl | 50×50μl |
MF2310-B | pCAMBIA2301 對照載體 (10ng/μl) | 10μl | 10μl |
注意事項
1） 感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融和放置時(shí)間過(guò)長(cháng)，以免降低感受態(tài)細胞的轉化效率。
2） 整個(gè)轉化操作，嚴格根據相應溫度及無(wú)菌條件要求進(jìn)行。
3） 加入質(zhì)粒的體積不應大于感受態(tài)體積的1/10。質(zhì)粒不純或存在乙醇等有機物污染，會(huì )導致轉化效率急劇下降。質(zhì)粒增大一倍，轉化效率下降一個(gè)數量級。
4） 為確保zui高轉化效率，整個(gè)操作過(guò)程應盡量輕柔，并保持低溫。
5） 轉化高濃度的質(zhì)?？上鄳獪p少zui終涂板用量。
6） 平板上克隆密度過(guò)大時(shí)，由于營(yíng)養不足，克隆生長(cháng)變慢，菌落變小。為獲得大菌落，應減少質(zhì)粒用量。
7） 利fu平濃度應≤25μg/ml，過(guò)高濃度不利于農桿菌生長(cháng)，會(huì )降低其生長(cháng)速度和轉化效率。我司EHA101感受態(tài)計算轉化效率時(shí)所用平板只含50μg/ml卡那mei素，若所用平板含20μg/ml 利fu平，則轉化效率降低到1/2。
8） 培養基中加入利fu平的目的是防止雜菌生長(cháng)、篩選農桿菌；根據所用菌株抗性加入Ti質(zhì)粒篩選抗生素可防止Ti質(zhì)粒丟失，但這些篩選抗生素不利于農桿菌的轉基因操作，所以一般培養農桿菌時(shí)不考慮這些篩選抗生素，因Ti質(zhì)粒丟失的概率極低（基本可以忽略）。
9） 為了您的安全和健康，請穿實(shí)驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
1) 將0.1 cm店擊杯和杯蓋從儲存液中拿出倒置于干凈吸水紙上5min，待其瀝干水分，正置5min，使乙醇充分揮發(fā)干凈，立即插入冰中，壓實(shí)冰面，電極杯頂離冰面0.5cm以方便蓋上杯蓋，冰中靜置5min使其充分降溫。
2) 取-80℃保存的感受態(tài)細胞于室溫或手心片刻待其部分融化，達到冰水混合狀態(tài)時(shí)插入冰浴中使其*融化。
3) 往50μl感受態(tài)細胞懸液中加入0.01~1μg（體積不大于6μl）質(zhì)粒DNA，用手管底使其混勻，立即插入冰中。用槍輕輕吹打混勻感受態(tài)細胞-質(zhì)粒之后快速轉移到店擊杯中，蓋上杯蓋，空管保留待用【注意：由于感受態(tài)轉化效率較高，*次使用做預試驗確定zui加的質(zhì)粒用量】。
4) 啟動(dòng)電轉儀，設置參數：C=25 μF，PC=200 ohm，V=2400 V（此參數參考Bio-rad，具體使用請參考電轉儀推薦步驟來(lái)操作），將店擊杯快速放入電轉槽中，店擊完成快速插入冰中。
5) 加入700 μl無(wú)抗生素的LB并轉移到感受態(tài)空管中，于28℃振蕩培養2~3h。
6) 6,000rpm離心1min，吸掉600ul上清，之后用槍輕輕吹打重懸菌體。之后加到含相應抗生素的LB或YEB平板上，用無(wú)菌玻棒輕輕的將細胞均勻涂開(kāi)。室溫正置10 min，待液體被吸收后，倒置平板，28℃培養2-3天。【注意：當平板只含轉化所用雙元載體抗生素時(shí)，28℃培養48h即可；當平板中加入雙元載體抗生素的同時(shí)，再加入20μg/ml 利fu平時(shí)，需28℃培養60h；若使用的平板含50μg/ml 利fu平，需在28℃培養72-90h?！?/span>
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MF2305-1000UL | AGL1 Chemically Competent Cell 農桿菌化學(xué)感受態(tài)細胞 | 10×100μl |
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MS0014-5G | Rifampicin, USP Grade 利fu平 | 5g |
MS0016-5G | Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壯觀(guān)mei素二妍酸鹽五水合物 | 5g |
MS0016-25G | Spectinomycin Dihydrochloride Pentahydrate 壯觀(guān)mei素二妍酸鹽五水合物 | 25g |
MS0017-5G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽 | 5g |
MS0017-25G | Carbenicillin, Disodium Salt 羧芐青mei素二鈉鹽 | 25g |
MS0019-10G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素 | 10g |
MS0019-25G | Kanamycin Sulfate 硫酸卡那mei素 | 25g |
MS0025-1G | Gentamycin Sulfate Salt 硫酸慶大mnei素 | 1g |
MS0023-25G | Streptomycin Sulfate, USP Grade 硫酸鏈mei素 | 25g |
附表1 固體和液體LB培養基配方
組分Component | LB（液體）/升 | LB（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 10g | 10g |
酵母提取物 Yeast extract | 5g | 5g |
氯化鈉 NaCl | 10g | 10g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂 Agar | / | 15g |
附表2 固體和液體YEB培養基配方
組分Component | YEB（液體）/升 | YEB（固體）/升 |
胰蛋白胨 Tryptone | 5g | 5g |
酵母提取物 Yeast extract | 1g | 1g |
牛肉浸膏 Beef Extract | 5g | 5g |
蔗糖 Sucrose | 5g | 5g |
七水硫sun鎂 MgSO4·7H2O | 0.49g | 0.49g |
1N NaOH | 調整pH至7.0 | 調整pH至7.0 |
瓊脂 Agar | / | 15g |
附表3常見(jiàn)農桿菌對抗生素敏感性總表
農桿菌菌株 | 羧芐（carb） | 鏈mei素（strep） | 利fu平（rif） | 慶大mei素（gent） | 卡那mei素（kan） |
EHA101 | S | S | R | S | R |
EHA105 | S | S | R | S | S |
LBA4404 | S | R | R | S | S |
GV3101 | S | S | R | R | S |
AGL1 | R | S | R | S | S |
【備注】：S代表敏感，R代表抗性。 | |||||
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學(xué)和生物技術(shù)領(lǐng)域研究的試劑、儀器和實(shí)驗室消耗品與實(shí)驗服務(wù)工作，主要從事細胞生物學(xué)、植物學(xué)、分子生物學(xué)、免疫學(xué)、生物化學(xué)、蛋白組學(xué)。生物制藥與診斷試劑研發(fā)生產(chǎn)等領(lǐng)域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信"的經(jīng)營(yíng)理念。堅持"品質(zhì)保障"的原則為廣大客戶(hù)提供優(yōu)質(zhì)產(chǎn)品。
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