酵母，如釀酒酵母、裂殖酵母和畢赤酵母，通常用于生物學(xué)實(shí)驗研究。酵母是易于培養的單細胞真核生物，他們的基因和蛋白質(zhì)與哺乳動(dòng)物具有很好的相似性，所以是生物模型。
酵母細胞用于研究基因功能，蛋白質(zhì)相互作用，細胞通路等，也是大規模異源蛋白表達和小分子生產(chǎn)的宿主，在發(fā)酵，釀造和制藥行業(yè)等起著(zhù)*的作用。涉及酵母的常見(jiàn)的實(shí)驗有酵母雙/三雜交系統，突變體篩選庫和同源重組，等等。
為什么我們需要酵母感受態(tài)細胞?
通常，在實(shí)驗過(guò)程中需外源DNA引入到酵母細胞。引入基因片段(線(xiàn)性ssDNA或質(zhì)粒)是通過(guò)酵母細胞的轉化來(lái)實(shí)現的，具體方法有化學(xué)法，如醋酸鋰和聚乙二醇(PEG)或電穿孔法。
有效的酵母轉化需要高質(zhì)量的酵母感受態(tài)細胞為開(kāi)始。勝任力則是指細胞能吸收游離的細胞外的遺傳物質(zhì)(如質(zhì)粒DNA)的能力。
二、酵母感受態(tài)細胞的制備
獲得感受態(tài)細胞相當簡(jiǎn)單，但許多研究人員在實(shí)現良好的生存比例和轉換效率時(shí) 遇到問(wèn)題。常見(jiàn)的誤區包括由于制備條件惡劣導致高的細胞死亡率，或由于無(wú)效的感受態(tài)細胞制備導致轉化效率低。
雖然酵母細胞和大腸桿菌一樣容易生長(cháng)和轉化，但它們需要不同的處理方法來(lái)制備感受態(tài)細胞和轉化。酵母細胞像哺乳動(dòng)物細胞一樣，有類(lèi)似的處理程序。典型的酵母感受態(tài)細胞制備協(xié)議如下:
過(guò)夜培養你想轉化的酵母菌菌株，使用營(yíng)養豐富的培養基培養不含質(zhì)粒的細胞。對于已經(jīng)含有質(zhì)粒的細胞，使用適當的選擇性培養基來(lái)維持質(zhì)粒。
當細胞密度達到1 - 2 x 107cells/mL，離心收獲細胞。細胞密度可以通過(guò)使用分光光度計在OD600檢測，或者使用血球計在顯微鏡下計數細胞。
沖洗細胞，重懸于無(wú)菌水，離心，棄上清，重復此步驟兩次以*清洗細胞。
一次洗完，將細胞重懸于感受態(tài)細胞溶液，分裝，大約每管108個(gè)細胞，每個(gè)轉化反應將使用這些數量的細胞。分裝好的管子放于-80°C，供以后實(shí)驗使用。
在所有步驟中，使用質(zhì)量好的無(wú)菌過(guò)濾器消毒過(guò)的試劑，以防止污染問(wèn)題。
感受態(tài)細胞溶液包含濃度的冷凍保護劑，這些濃度應該在你的實(shí)驗室標準化，根據使用的酵母菌株和細胞的濃度。標準協(xié)議使用5%的甘油 + 10% DMSO溶液混合，這種配方被廣泛應用來(lái)制備感受它細胞，也可根據具體情況進(jìn)行輕微的改變或調整。