酵母,如釀酒酵母、裂殖酵母和畢赤酵母,通常用于生物學(xué)實(shí)驗研究。酵母是易于培養的單細胞真核生物,他們的基因和蛋白質(zhì)與哺乳動(dòng)物具有很好的相似性,所以是好的生物模型。
酵母細胞用于研究基因功能,蛋白質(zhì)相互作用,細胞通路等,也是大規模異源蛋白表達和小分子生產(chǎn)的宿主,在發(fā)酵,釀造和制藥行業(yè)等起著(zhù)*的作用。涉及酵母的常見(jiàn)的實(shí)驗有酵母雙/三雜交系統,突變體篩選庫和同源重組,等等。
關(guān)于冷凍保護劑
甘油和二甲亞砜(DMSO)是常見(jiàn)的細胞可透過(guò)性冷凍保護劑,用于準備感受態(tài)細胞。它們穿透細胞,防止冰晶的形成,冰晶可能會(huì )在凍結過(guò)程中導致膜破裂。甘油和DMSO也有一定的缺點(diǎn),他們可能會(huì )導致細胞毒性,特別是在解凍過(guò)程中。
非細胞透過(guò)性的試劑如蔗糖和海藻糖等也可用于替代物。山梨糖醇鈣也是一個(gè)好的冷凍保護劑,尤其適用于電穿孔制備感受態(tài)細胞。
酵母感受態(tài)細胞的儲存
每次轉化時(shí)使用新鮮的感受態(tài)細胞是明智的,因為長(cháng)時(shí)間儲存,轉化效率會(huì )降低,但這并不總是可行的。
感受態(tài)細胞可以存儲在-80°C長(cháng)達一年,沒(méi)有轉化潛能的損失。然而,瞬間凍結在液氮或-80°C冰箱是不建議的。感受態(tài)細胞需要在冷凍保護劑中,像哺乳動(dòng)物細胞一樣緩慢地冷凍。
1. 使用硬紙板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等儲存。
2. 用紙片等將盒子里的細胞管隔開(kāi),分成多個(gè)小格子。
3. 復蘇過(guò)程中,在37°C解凍細胞,轉化前用豐富培養基清洗防凍劑。