Coelenterazine 腔腸素系列的工作原理:
以Coelenterazine 腔腸素系列為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下,氧化腔腸素,產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物, 并在此過(guò)程中發(fā)射藍色光。與甲蟲(chóng)熒光素/熒光素酶系統不同,腔腸素/熒光素酶系統不需要三磷酸腺苷(ATP),因此更便于體內生物熒光的研究。目前研究得zui透徹的以腔腸素為底物的熒光素酶來(lái)源于海腎(Renilla), 即海腎熒光素酶 (Renilla Luciferase,簡(jiǎn)稱(chēng)Rluc)。
Coelenterazine 腔腸素系列也是另一族以水母發(fā)光蛋白為代表的海洋發(fā)光蛋白的輔助因子。在一個(gè)以熒光素/熒光素酶系統為基礎略作改變的系統中,水母發(fā)光蛋白穩定的地結合了處于反應狀態(tài)的腔腸素,氧化反應在水母發(fā)光蛋白與鈣離子結合后開(kāi)始進(jìn)行。這種對鈣離子的反應是不依賴(lài)于氧氣的,水母發(fā)光蛋白所發(fā)射的藍色光的量和酶濃度及Ca++ 濃度成正比。這種特性使得腔腸素可作為熒光素酶,氧氣及鈣離子的檢測試劑。
水母發(fā)光蛋白/Coelenterazine 腔腸素系列系統與熒光鈣離子指示劑相比,在檢測鈣離子方面具有以下優(yōu)點(diǎn): 可檢測較大范圍的鈣濃度 – 從0.1uM 至 >100uM;樣品無(wú)自體熒光,背景熒光低于使用熒光鈣離子指示劑;雖然信號比使用熒光鈣離子指示劑弱,但是通過(guò)成像儀器可以得到更高的信噪比,因此具有更高的靈敏度。由于水母發(fā)光蛋白復合體不會(huì )被運輸到細胞外,所以可進(jìn)行數小時(shí)至數天的鈣離子的觀(guān)測。
Coelenterazine 腔腸素系列的疏水性使它易通過(guò)細胞膜,適于全細胞研究。