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Cell apoptosis細胞凋亡；Mitochondrial membrane potential線(xiàn)粒體膜電位；MitoTracker；MitoSOX；JC-1；JC-10；Rhodamine 123；CAS：555-60-2；

基本介紹：

線(xiàn)粒體（Mitochondrial）是一種存在于大多數真核細胞中的由兩層膜包被的細胞器，約占細胞體積10%。作為一種多形細胞器，其結構因細胞類(lèi)型、細胞周期狀態(tài)意思胞內代謝狀態(tài)而不斷變化。線(xiàn)粒體至關(guān)重要的功能是由氧化磷酸化（Oxphos）和脂質(zhì)氧化介導的能量產(chǎn)生。線(xiàn)粒體內還參與其他幾種代謝活動(dòng)，包括尿素生成，血紅素和非血紅素鐵和類(lèi)固醇生物起源，以及胞內鈣離子（Ca2+）穩態(tài)。線(xiàn)粒體還在凋亡中發(fā)揮重要作用。目前對線(xiàn)粒體參與生理功能的了解只有很少一部分，而對其作用機理和調控方式的了解就更少。

線(xiàn)粒體（Mitochondrial）的分布依據細胞能量水平而變化，是細胞類(lèi)型、細胞周期狀態(tài)和增殖情況的一種功能表現。比如，褐色脂肪組織細胞，肝細胞和某些腎上皮細胞富集存在于活躍線(xiàn)粒體中，而靜息免疫系統祖細胞或前體細胞使用線(xiàn)粒體選擇性探針染色率很低。阿爾茨海默病線(xiàn)粒體數目減少，且其蛋白和核酸易被包括一氧化氮在內的活性氧（ROS）所攻擊造成損傷。

我司提供一系列線(xiàn)粒體選擇性熒光探針和有機染料，能夠用來(lái)監測細胞形態(tài)和細胞器功能。大多數線(xiàn)粒體選擇性有機染料的攝取依賴(lài)于線(xiàn)粒體膜電位。因此這些染料能讓研究者標記線(xiàn)粒體活動(dòng)、定位、含量，以及觀(guān)察一些能改變線(xiàn)粒體功能的某些藥物的生理效應。

線(xiàn)粒體探針：

一、MitoTracker Probes（可固定的線(xiàn)粒體選擇性探針）

1）傳統線(xiàn)粒體探針的缺點(diǎn)：

傳統線(xiàn)粒體探針如羅丹明123（Rhodamine 123）雖然可立即聚集在功能線(xiàn)粒體上，然而，一旦線(xiàn)粒體膜電位喪失，這些探針就能很容易清洗掉離開(kāi)細胞。當碰到細胞需要進(jìn)行醛類(lèi)固定或細胞內含影響膜電位藥物的實(shí)驗中，這些探針則受到限制，不可使用。

2）MitoTracker線(xiàn)粒體探針的優(yōu)點(diǎn)

Mitotracker正克服傳統探針的缺點(diǎn)而被生產(chǎn)，其能夠聚集在活線(xiàn)粒體上，并且細胞固定中也能良好維持。其中，Mitotracker orange，red，and deep red這三種探針經(jīng)透化（permeabilization）后仍能良好維持。在接下來(lái)免疫細胞化學(xué)（ICC）、原位雜交（ISH）或電鏡實(shí)驗的處理步驟中樣本仍保留線(xiàn)粒體的活細胞染色形態(tài)。另外，Mitotracker探針去除病原細胞線(xiàn)粒體染色可能遇到的一些問(wèn)題，因為一旦線(xiàn)粒體染色后，細胞即可被固定然后進(jìn)行結果分析。

3）MitoTracker線(xiàn)粒體探針產(chǎn)品

我們提供7種Mitotracker探針，它們在光譜特性、氧化態(tài)以及可否固定幾個(gè)參數上有所差異，具體見(jiàn)下表。

【注1】：MitoTracker® Green FM（#M7514）在水溶液中無(wú)熒光；

【注2】：MitoTracker® Orange CM-H2TMRos（#M7511），MitoTracker® Red CM-H2XRos（#M7513）為還原態(tài)探針，無(wú)熒光。只有被氧化后才發(fā)熒光。

4）MitoTracker線(xiàn)粒體探針訂購信息

以上所有產(chǎn)品均為L(cháng)ife（Invitrogen）原裝，原始包裝為20x50 µg（20支50µg單個(gè)包裝構成）。我司對M7512，M7514，M22426進(jìn)行拆開(kāi)銷(xiāo)售，特惠價(jià)為350元/支，單支50µg；對M7513，單支優(yōu)惠價(jià)格為400元?，F貨銷(xiāo)售，歡迎訂購。

二、MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator（線(xiàn)粒體超氧化物探針）

1）背景介紹

線(xiàn)粒體超氧化物（Mitochondrial superoxide）是氧化磷酸化的副產(chǎn)物。一條緊密偶聯(lián)的電子運傳遞鏈中約1-3%被消耗的線(xiàn)粒體氧不能*被還原，這些‘遺漏’的電子能與分子氧快速反應產(chǎn)生超氧陰離子，即線(xiàn)粒體中含量zui高的活性氧（ROS）分子。細胞過(guò)氧化物生成量的增加在心血管疾病中得到闡釋?zhuān)@些疾病包括高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化和糖尿病相關(guān)的血管損傷，以及神經(jīng)退化疾病如帕金森疾病，阿爾茨海默病和肌wei縮性[脊髓]側索硬化（ALS）。

2）產(chǎn)品描述

MitoSOX紅色線(xiàn)粒體超氧化物熒光探針（MitoSOX Red Mitochondrial Superoxide Indicator）是二氫乙啶（dihydroethidum，DHE）的一種陽(yáng)離子衍生物，特別設計高度特異性檢測活細胞線(xiàn)粒體超氧化物。

MitoSOX Red是一種特異性靶向活細胞線(xiàn)粒體的新型熒光探針，具細胞膜滲透性，且能快速和選擇性結合線(xiàn)粒體。一旦進(jìn)入線(xiàn)粒體，被超氧化物氧化，與核酸結合后產(chǎn)生很強的紅色熒光。MitoSOX Red能夠立即被超氧化物，并不是其他ROS-或RNS（活性氮）生成系統氧化。超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）能夠預防MitoSOX Red被氧化。

MitoSOX Red可用于在對活細胞線(xiàn)粒體釋放的超氧化物的直接檢測中區別純化線(xiàn)粒體的人為誤差。另外，MitoSOX Red是一種有價(jià)值的工具，用來(lái)篩選多種疾病中調節氧化應激的藥物。

3）產(chǎn)品特點(diǎn)

• 容易為超氧化物而不是其他的ROS、RNS生成系統氧化

• 吸收波長(cháng)⁄發(fā)射波長(cháng)zui大值：~510⁄580 nm

• 用于活細胞成像

  快速選擇性靶向線(xiàn)粒體

4）MitoSOX Red訂購信息

以上所有產(chǎn)品均為L(cháng)ife（Invitrogen）原裝，原始包裝為10x50 µg（10支50µg單個(gè)包裝構成）。我司對M36008進(jìn)行拆開(kāi)銷(xiāo)售，特惠價(jià)為650元/支，單支50µg，現貨銷(xiāo)售，歡迎訂購。

三、JC-1/JC-10線(xiàn)粒體膜電位檢測探針（早期凋亡檢測）

1）背景介紹

線(xiàn)粒體膜通透性的改變是細胞早期凋亡發(fā)生的重要特征之一。

凋亡早期，線(xiàn)粒體膜通透性增加，線(xiàn)粒體蛋白包括：細胞色素C、Smac/DIABLO、HtrA2/OMI、核酸內切酶G（EndoG）、凋亡誘導因子（AIF）等，從線(xiàn)粒體基質(zhì)釋放到細胞漿。細胞色素C的釋放伴隨著(zhù)線(xiàn)粒體膜電位的喪失，呼吸鏈障礙，鈣離子的釋放。

線(xiàn)粒體膜電位的破壞是誘導細胞凋亡后zui早發(fā)生的胞內事件，目前常用一些親脂性陽(yáng)離子染料如JC-1，JC-10，羅丹明123（Rhodamine 123）等在線(xiàn)粒體膜電位變化中聚合形式的差異來(lái)區分正常細胞和凋亡細胞?；驹硎牵赫＜毎嘘?yáng)離子染料在線(xiàn)粒體中積累并聚合，聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光；凋亡細胞中由于線(xiàn)粒體膜電位的喪失，染料不能在線(xiàn)粒體中積累并以單體形式存在于胞漿中，單體發(fā)出綠色熒光。

2）產(chǎn)品描述

JC-1是一種廣泛用于檢測線(xiàn)粒體膜電△Ψm位的理想熒光探針。JC-1染料以電勢依賴(lài)性的方式積聚在線(xiàn)粒體內，可以用來(lái)檢測細胞、組織或純化的線(xiàn)粒體膜電位。正常線(xiàn)粒體內，JC-1聚集在線(xiàn)粒體基質(zhì)中形成聚合物，聚合物發(fā)出強烈的紅色熒光（Ex=585 nm, Em=590 nm）；不健康的線(xiàn)粒體由于膜電位的下降或喪失，JC-1只能以單體的形式存在于胞漿中，產(chǎn)生綠色熒光（Ex=514 nm, Em=529 nm）。JC-1不僅可用于定性檢測，因顏色的變化可以非常直接的反映出線(xiàn)粒體膜電位的變化。也可以用于定量檢測，因線(xiàn)粒體的去極化程度可以通過(guò)紅/綠熒光強度的比例來(lái)衡量。

JC-10是JC-1的升級產(chǎn)品，優(yōu)勢在其比JC-1具更好的水溶性，特別適合替代需要更好染料濃度的實(shí)驗。JC-10的檢測原理同JC-1。

3）訂購信息

4）相關(guān)產(chǎn)品（凋亡誘導劑）

線(xiàn)粒體凋亡研究中常需要陽(yáng)性誘導劑建立陽(yáng)性的凋亡模型，從而用于細胞凋亡機理或凋亡相關(guān)藥物的篩選。

CCCP，即Carbonyl cyanide 3-chlorophenylhydrazone，一種質(zhì)子載體（H+ionophore），是一種強效的線(xiàn)粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，促使線(xiàn)粒體內膜對H+產(chǎn)生通透性，導致線(xiàn)粒體內膜兩側的膜電位喪失，誘導凋亡發(fā)生。也可作用于葉綠體膜，抑制光合作用；CCCP還可抑制內質(zhì)網(wǎng)-高爾基體（ER-Golgi）之間的蛋白轉運，高親和力結合細胞色素C氧化酶。

FCCP，即Carbonyl cyanide 4-(trifluoromethoxy)phenylhydrazone，一種質(zhì)子載體（H+ionophore），也是一種強效的線(xiàn)粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑，促使質(zhì)膜和線(xiàn)粒體膜去極化。

 — — Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】

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