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技術(shù)文章
Hoechst染色方法

1.貼壁細胞

1)   取普通潔凈蓋玻片于70%乙醇中浸泡5分鐘或更長(cháng)時(shí)間,無(wú)菌超凈臺內吹干或用細胞培養PBS或0.9%NaCl等溶液洗滌三遍,再用細胞培養液洗滌一遍。將蓋玻片置于六孔板內,種入細胞培養過(guò)夜,使約為50%-80%滿(mǎn)。

2)   刺激細胞發(fā)生凋亡后,吸盡培養液,加入0.5ml固定液,固定10分鐘或更長(cháng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。

3)   去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數次。

4)   加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數次。

5)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

6)   滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上貼有細胞的蓋玻片,盡量避免氣泡。使細胞接觸封片液,切勿弄反。

7)   熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

 

2. 懸浮細胞

1)   離心收集細胞樣品于1.5ml離心管內,加入0.5ml固定液,緩緩懸起細胞,固定10分鐘或更長(cháng)時(shí)間(可4℃過(guò)夜)。

2)   離心去固定液,用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。洗滌期間手動(dòng)晃動(dòng)。

3)   zui后一次離心后吸去大部分液體保留約50ml液體,再緩緩懸起細胞,滴加至載玻片上,盡量使細胞分布均勻。

4)   稍晾干,使細胞貼在載玻片上不易隨液體流動(dòng)。

5)   均勻滴上0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。用吸水紙從邊緣吸去液體,微晾干。

6)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

7)   滴一滴抗熒光淬滅封片液于載玻片上,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

8)   H. 熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

 

3. 組織切片

1)   常規包埋切片后,脫蠟,透明。

2)   PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘,吸盡液體。洗滌時(shí)宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)數次??稍诹装逯胁僮?。

3)   加入0.5ml Hoechst 33258染色液,染色5分鐘。也宜用搖床,或手動(dòng)晃動(dòng)。

4)   用PBS或0.9%NaCl洗兩遍,每次3分鐘。

5)   將切片置于載玻片上,滴一滴抗淬滅封片液,蓋上一潔凈的蓋玻片,盡量避免氣泡。

6)   熒光顯微鏡可檢測到呈藍色的細胞核。

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