微生物的生長(cháng),除了受本身的遺傳特性決定外,還受到許多外界因素的影響,如營(yíng)養物濃度、溫度、水分、氧氣、pH等。微生物的種類(lèi)不同,培養的方式和條件也不盡相同,其貯存方法也是很有講究的。
細菌和其它生物一樣,大多數屬異養菌,必須從周?chē)h(huán)境中攝取營(yíng)養,進(jìn)行新陳代謝及生長(cháng)繁殖等生命活動(dòng)。人為的提供細菌生長(cháng)繁殖所需的營(yíng)養物質(zhì)(適宜的培養基)和創(chuàng )造適合細菌生長(cháng)繁殖的有利條件如溫度、濕度、氣體等,能使細菌在體外迅速生長(cháng)繁殖。
正確配制培養基是微生物培養的基礎步驟之一,實(shí)驗室使用各種基礎成分制備培養基時(shí),應按照配方準確配制,并記錄相關(guān)信息,如:培養基名稱(chēng)和類(lèi)型及試劑級別、每個(gè)成分物質(zhì)含量、制造商、批號、pH、培養基體積(分裝體積)、無(wú)菌措施(包括實(shí)施的方式、溫度及時(shí)間)、配置日期、人員等,以便溯源。
培養基滅菌常見(jiàn)的滅菌方法有:
1.化學(xué)物質(zhì)滅菌:藥物與微生物細胞中的成分反應,使蛋白質(zhì)變性、酶失活;使用范圍:器皿、雙手和實(shí)驗室、無(wú)菌室的環(huán)境滅菌,不能用于培養基滅菌;常用的有酒精、來(lái)蘇爾等。
2.輻射滅菌:原理是利用高能量的電磁輻射與菌體核酸的光化學(xué)反應造成菌體死亡;常用的有紫外線(xiàn)、X射線(xiàn)和γ射線(xiàn),用于室內空氣及器皿表面滅菌。
3.干熱滅菌:原理是利用高溫對微生物有氧化、蛋白質(zhì)變性和電解質(zhì)濃縮作用而殺滅微生物;常用灼燒和電熱箱加熱,140-180℃ 1-2小時(shí),適于對玻璃及金屬用具及沙土管滅菌。
4.濕熱滅菌:原理是直接用蒸汽滅菌,蒸汽在冷凝時(shí)能釋放出大量潛熱,蒸汽具有強大的穿透力,破壞菌體蛋白和核酸的化學(xué)鍵,使酶失活,微生物因代謝障礙而死亡,水煮常壓滅菌:100℃,或飽和蒸汽滅菌:一般121℃,30分鐘,適合培養基和發(fā)酵設備滅菌。
5.過(guò)濾除菌:除菌原理是利用微生物不能透過(guò)濾膜除菌,方法是使用0.01~0.45 μm孔徑濾膜,用于壓縮空氣、酶溶液及其他不耐熱化合物溶液除菌。