嘌呤霉素是一種蛋白質(zhì)合成抑制劑,它具有與tRNA分子末端類(lèi)似的結構，能夠同氨基酸結合，代替氨?；膖RNA同核糖體的A位點(diǎn)結合，并摻入到生長(cháng)的肽鏈中。用嘌呤霉素篩選細胞方法如下：
嘌呤霉素篩選細胞
轉染(24孔板進(jìn)行)或電轉后培養24小時(shí)，按10%密度傳代(傳至36mm平皿)，繼續培養24小時(shí)，待細胞密度增至20%-25%回合時(shí);
去掉培養液，PBS洗一次，加入按照最佳嘌呤霉素篩選細胞的濃度(殺傷曲線(xiàn)試驗確定)配制好的嘌呤霉素篩選細胞培養基2-3ml。
根據培養基的顏色和細胞的存活情況，每隔2天更換一次嘌呤霉素篩選細胞用培養基(培養基用量為2-4ml，細胞多，多家培養基，細胞少，少加培養基)，一般在3-1天內出現細胞大量或少量死亡情況(如果轉染效率或電轉效率高，則死亡少;
如果轉染率或電轉率低，則死亡多;如果篩選濃度偏低，嘌呤霉素篩選細胞培養基用量少，細胞密度大于80%，會(huì )導致大量假陽(yáng)性克隆)。
如果少選第一周，出現細胞大量死亡，則在原培養皿中繼續加入嘌呤霉素篩選細胞培養基篩選一周;如果刪選第一周，出現細胞少量死亡，則把細胞按照10%密度傳代(傳至35mm平皿，傳一個(gè)皿即可，多余細胞丟棄)，利用少選培養基進(jìn)行篩選一周;
篩選第二周結束后，則把細胞消化下來(lái)。進(jìn)行重點(diǎn)稀釋(10ul培養基中含1個(gè)細胞，用篩選培養基)，把上述10ul細胞懸液假日96孔板中(提前加入40ul篩選培養基)，伊紅加入24孔，4小時(shí)候觀(guān)察每個(gè)孔的情況。記錄只含一個(gè)細胞的孔，含有一個(gè)細胞的孔用于繼續篩選，其余孔舍棄;
根據培養基的顏色和細胞生長(cháng)情況換入新的嘌呤霉素篩選細胞用培養基待細胞密度為80%時(shí)，將其傳代至24孔板中增殖，待細胞密度為80%時(shí)，將其傳代至6孔板中增殖，待細胞密度為80%時(shí)，將其傳代至T25瓶(一傳3)中增殖，每隔3天換液。
細胞大量擴增后，一瓶用于提取中RNA進(jìn)行QPCR檢測，一瓶用于總蛋白進(jìn)行WB檢測，另一瓶用于保種，根據QPCR和WB結果取舍陽(yáng)性克隆。
嘌呤霉素篩選細胞方法如上，具體的嘌呤霉素篩選細胞讓發(fā)如上，嘌呤霉素穩定性高，可以常溫運輸，收到產(chǎn)品后4℃存放;
嘌呤霉素在室溫條件下可存放3個(gè)月，4℃條件下保質(zhì)期一年。為了達到理想的穩定狀態(tài)和最長(cháng)的保質(zhì)期，最好存放于-20°C，保質(zhì)期為2年。